Fehlersuche beim ELISA-Experiment: Analyse häufiger Probleme und Ursachen

27. Juni 2024

Die ELISA-Kits von ELKsind bekannt für ihre umfassende Palette an Indikatoren und ihre außergewöhnliche Integrität, erhältlich in Tausenden von Einheiten. Sie zeichnen sich durch hohe Präzision aus, mit Variationskoeffizienten (VK) innerhalb und zwischen den Tests von unter 10 % und einer Kreuzreaktionsrate von weniger als 5 %.

Diese Kits bieten gute Wiederfindungsraten zwischen 85 % und 115 %, hohe Spezifität mit einer Kreuzreaktionsrate von unter 5 % und hohe Empfindlichkeit im Picogramm (pg) Bereich. Darüber hinaus werden sie mit einem kompletten Satz gebrauchsfertiger Reagenziengeliefert, was eine hervorragende Integrität und Benutzerfreundlichkeit gewährleistet.

Nach dem guten Empfang der ELK-Kits möchten wir heute einen Einblick in die Probleme geben, die während der Durchführung der Technik auftreten können:

Hoher Hintergrund / Unspezifische Färbung

Beschreibung der Ergebnisse:
- Nach dem Abschluss zeigen die Ergebnisse der gesamten Platte eine gleichmäßige gelbe oder helle Farbe.
- Die Standardkurve ist linear, aber der Hintergrund ist zu hoch.
Möglicher Grund:
- Die ELISA-Platte wurde nicht ausreichend gewaschen.
Empfehlungen und Vorsichtsmaßnahmen:
- Stellen Sie sicher, dass während des Waschvorgangs die gleiche Menge Waschlösung in jeden Mikrotiterbrunnen gegeben wird.
- Drücken Sie nach dem Waschen die ELISA-Platte fest auf das saugfähige Papier, um das restliche Puffer zu entfernen.

Keine Farbentwicklung auf der Platte

Beschreibung der Ergebnisse:
- Nach dem Farbreaktionsschritt sind alle Brunnen der ELISA-Platte farblos.
- Die positive Kontrolle ist nicht offensichtlich.
Möglicher Grund:
- Ein Reagenz oder ein Schritt fehlt.
Empfehlungen und Vorsichtsmaßnahmen:
- Überprüfen Sie das Handbuch im Detail und befolgen Sie die Arbeitsschritte genau.

Helle Farbe

Fall #1:

Beschreibung der Ergebnisse:
- Der Standard ist normal, aber die Farbe der Probe ist hell.
- Das visuelle Ergebnis ist normal, aber der Messwert des Mikrotiterplattenlesers ist niedrig.
Möglicher Grund:
- Die zu testende Probe enthält möglicherweise keine stark positiven Proben, daher kann das Ergebnis normal sein.
Empfehlungen und Vorsichtsmaßnahmen:
- Im Zweifelsfall bitte erneut testen.

Fall #2:

Beschreibung der Ergebnisse:
- Alle Brunnen, einschließlich Standard und Proben, sind heller in der Farbe.
Möglicher Grund:
- Reagenzien und Proben sind vor dem Gebrauch nicht ausgeglichen.
Empfehlungen und Vorsichtsmaßnahmen:
- Alle Reagenzien und Proben sollten etwa 30 Minuten bei Raumtemperatur ausgeglichen werden.

Fall #3:

Beschreibung der Ergebnisse:
- Schlechte Wiederholbarkeit
Möglicher Grund:
- Beim Hinzufügen von Flüssigkeit bleibt zu viel an der Seitenwand der Brunnen haften.
Empfehlungen und Vorsichtsmaßnahmen:
- Beim Hinzufügen von Flüssigkeit sollte die Spitze versuchen, die Flüssigkeit entlang der unteren Seitenwand der Brunnen hinzuzufügen, ohne den Boden des Brunnens zu berühren.

Fall #4:

Beschreibung der Ergebnisse:
- Die Farbe der Platte ist chaotisch und unregelmäßig.
Mögliche Gründe:
- Kreuzkontamination durch manuelles Waschen der Platte.
- Kreuzkontamination beim Klopfen.
Empfehlungen und Vorsichtsmaßnahmen:
- Beim Waschen der Platten von Hand sollten die ersten 3 Injektionen der Lotion sofort verworfen werden. Stellen Sie die Einweichzeit für die nächsten Male ein, um Kreuzkontaminationen zu reduzieren.
- Verwenden Sie ein geeignetes saugfähiges Papiertuch beim Klopfen der Platte. Klopfen Sie keine irrelevanten Substanzen in den Brunnen der Platte und versuchen Sie, nicht an derselben Stelle zu klopfen, um Kreuzkontaminationen zu vermeiden.

Durch die Einhaltung dieser Fehlersuche-Schritte können die Zuverlässigkeit und Genauigkeit Ihrer ELISA-Experimente erheblich verbessert werden.

Für detaillierte Protokolle und weitere Unterstützung konsultieren Sie immer das spezifische Handbuch, das mit Ihrem ELISA-Kit geliefert wird. Die folgenden sind meistverkaufte Indikatorenvon ELK, erhältlich bei CymitQuimica:

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