Solución de problemas de experimentos ELISA: Análisis de problemas comunes y causas

27 de junio de 2024

Los kits ELISA de ELK son conocidos por su amplia gama de indicadores y excepcional integridad, disponibles en miles de unidades. Presentan alta precisión con valores de coeficiente de variación (CV) intraensayo e interensayo por debajo del 10% y una tasa de reacción cruzada de menos del 5%.

Estos kits ofrecen buenas tasas de recuperación entre el 85% y el 115%, alta especificidad con una tasa de reacción cruzada inferior al 5% y alta sensibilidad a nivel de picogramas (pg). Además, vienen con un conjunto completo de reactivos listos para usar, asegurando excelente integridad y facilidad de uso.

Después de la buena recepción de los kits de ELK, hoy queremos dar una visión de los problemas que se pueden experimentar durante la realización de la técnica:

Fondo alto / Tinción no específica

Descripción de resultados:
- Después de la terminación, los resultados de toda la placa muestran un color amarillo uniforme o claro.
- La curva estándar es lineal, pero el fondo es demasiado alto.
Posible razón:
- La placa ELISA no se lavó suficientemente.
Recomendaciones y precauciones:
- Asegúrese de que se añada la misma cantidad de solución de lavado a cada micropocillo durante el proceso de lavado.
- Después de lavar, presione firmemente la placa ELISA sobre el papel absorbente para eliminar el buffer residual.

Placa sin color

Descripción de resultados:
- Después del paso de desarrollo de color, todos los pocillos de la placa ELISA están incoloros.
- El control positivo no es obvio.
Posible razón:
- Falta de un reactivo o un paso.
Recomendaciones y precauciones:
- Revise el manual en detalle y siga estrictamente los pasos operativos.

Color claro

Casos #1:

Descripción de resultados:
- El estándar es normal, pero el color de la muestra es claro.
- El resultado visual es normal, pero el valor de lectura del lector de microplacas es bajo.
Posible razón:
- La muestra a probar puede no contener muestras fuertemente positivas, por lo que el resultado puede ser normal.
Recomendaciones y precauciones:
- En caso de duda, por favor pruebe nuevamente.

Casos #2:

Descripción de resultados:
- Todos los pocillos, incluidos estándar y muestras, son más claros en color.
Posible razón:
- Los reactivos y las muestras no se equilibraron antes de usar.
Recomendaciones y precauciones:
- Todos los reactivos y muestras deben equilibrarse a temperatura ambiente durante unos 30 minutos.

Casos #3:

Descripción de resultados:
- Pobre repetibilidad
Posible razón:
- Al añadir líquido, queda demasiado en la pared medial de los pocillos.
Recomendaciones y precauciones:
- Al añadir líquido, la punta debe intentar añadir líquido a lo largo del fondo de la pared medial de los pocillos sin tocar el fondo del pocillo.

Casos #4:

Descripción de resultados:
- El color de la placa es caótico e irregular.
Posibles razones:
- Contaminación cruzada por lavado manual de la placa.
- Contaminación cruzada al golpear.
Recomendaciones y precauciones:
- Al lavar las placas a mano, las primeras 3 inyecciones de la loción deben descartarse inmediatamente. Ajuste el tiempo de remojo para las siguientes veces para reducir la contaminación cruzada.
- Use una toalla de papel absorbente adecuada al golpear la placa. No golpee sustancias irrelevantes en el pozo de la placa y trate de no golpear en la misma posición para evitar la contaminación cruzada.

Al seguir estos pasos de solución de problemas, la fiabilidad y la precisión de sus experimentos ELISA pueden mejorar significativamente.

Para protocolos detallados y más ayuda, consulte siempre el manual específico proporcionado con su kit ELISA. Los siguientes son indicadores más vendidos de ELK, disponibles en CymitQuimica:

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