Dépannage de l'expérience ELISA : Analyse des problèmes courants et des causes

27 juin 2024

Les kits ELISA de ELK sont connus pour leur large gamme d'indicateurs et leur intégrité exceptionnelle, disponibles en milliers d'unités. Ils présentent une haute précision avec des valeurs de coefficient de variation (CV) intra-test et inter-test inférieures à 10 % et un taux de réaction croisée de moins de 5 %.

Ces kits offrent de bons taux de récupération entre 85 % et 115 %, une haute spécificité avec un taux de réaction croisée inférieur à 5 % et une haute sensibilité au niveau du picogramme (pg). De plus, ils sont fournis avec un ensemble complet de réactifs prêts à l'emploi, garantissant une excellente intégrité et une facilité d'utilisation.

Après la bonne réception des kits ELK, aujourd'hui nous voulons donner un aperçu des problèmes qui peuvent être rencontrés lors de la réalisation de la technique :

Fonds élevé / Coloration non spécifique

Description des résultats :
- Après la terminaison, les résultats de toute la plaque montrent une couleur jaune ou claire uniforme.
- La courbe standard est linéaire mais le fond est trop élevé.
Raison possible :
- La plaque ELISA n'a pas été suffisamment lavée.
Recommandations et précautions :
- Assurez-vous que la même quantité de solution de lavage est ajoutée à chaque micropuits pendant le processus de lavage.
- Après le lavage, appuyez fermement sur la plaque ELISA sur le papier absorbant pour éliminer le tampon résiduel.

Pas de couleur sur la plaque

Description des résultats :
- Après l'étape de développement de la couleur, tous les puits de la plaque ELISA sont incolores.
- Le contrôle positif n'est pas évident.
Raison possible :
- Oubli d'un réactif ou d'une étape.
Recommandations et précautions :
- Examinez le manuel en détail et suivez strictement les étapes opérationnelles.

Couleur claire

Cas #1 :

Description des résultats :
- Le standard est normal, mais la couleur de l'échantillon est claire.
- Le résultat visuel est normal, mais la valeur de lecture du lecteur de microplaques est faible.
Raison possible :
- L'échantillon à tester peut ne pas contenir d'échantillons fortement positifs, donc le résultat peut être normal.
Recommandations et précautions :
- En cas de doute, veuillez tester à nouveau.

Cas #2 :

Description des résultats :
- Tous les puits, y compris le standard et les échantillons, sont plus clairs en couleur.
Raison possible :
- Les réactifs et les échantillons ne sont pas équilibrés avant utilisation.
Recommandations et précautions :
- Tous les réactifs et les échantillons doivent être équilibrés à température ambiante pendant environ 30 minutes.

Cas #3 :

Description des résultats :
- Mauvaise répétabilité
Raison possible :
- Lors de l'ajout de liquide, trop reste sur la paroi médiane des puits.
Recommandations et précautions :
- Lors de l'ajout de liquide, la pointe doit essayer d'ajouter le liquide le long du fond de la paroi médiane des puits sans toucher le fond du puits.

Cas #4 :

Description des résultats :
- La couleur de la plaque est chaotique et irrégulière.
Raisons possibles :
- Contamination croisée lors du lavage manuel de la plaque.
- Contamination croisée lors du tapotement.
Recommandations et précautions :
- Lors du lavage des plaques à la main, les 3 premières injections de la lotion doivent être immédiatement jetées. Réglez le temps de trempage pour les fois suivantes afin de réduire la contamination croisée.
- Utilisez une serviette en papier absorbant appropriée lors du tapotement de la plaque. Ne tapez pas des substances non pertinentes dans le puits de la plaque, et essayez de ne pas taper au même endroit pour éviter la contamination croisée.

En respectant ces étapes de dépannage, la fiabilité et la précision de vos expériences ELISA peuvent être considérablement améliorées.

Pour des protocoles détaillés et une assistance supplémentaire, référez-vous toujours au manuel spécifique fourni avec votre kit ELISA. Les indicateurs les plus vendus d'ELK, disponibles chez CymitQuimica, sont les suivants :

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